Определяне на съдържанието на оксалова киселина в плодове и зеленчуци чрез високоефективна течна хроматография (HPLC)
1. Експериментален принцип и дизайн на метода
Като често срещана органична киселина в плодовете и зеленчуците, съдържанието на оксалова киселина влияе пряко върху вкуса и хранителната стойност на храната. Този експеримент използва високоефективна течна хроматография с обратна фаза (RP-HPLC). При киселинни условия на мобилна фаза, оксаловата киселина се отделя по базовата линия от интерфериращите вещества, използвайки C18 хроматографска колона. За количествен анализ се използва ултравиолетов детектор, настроен на 210 nm, базиран на UV абсорбционните характеристики на карбоксилните групи в молекулите на оксаловата киселина.
2. Стандартна крива и подготовка на пробата
За приготвяне на стандартни разтвори се използва метод на градиентно разреждане: претеглят се точно 25,0 mg оксалова киселина дихидрат и се разреждат до 25 mL с ултрачиста вода, за да се получи изходен разтвор с концентрация 1 mg/mL. Той се разрежда последователно в серия от стандартни разтвори при 50, 100, 200, 400 и 800 µg/mL, като всяка концентрация се инжектира трикратно.
За приготвяне на пробата се използва микровълнова екстракция: претеглят се 5,00 g плодов/зеленчуков хомогенат, добавят се 10 mL 0,1 mol/L разтвор на солна киселина, обработват се при 60°C с микровълнова фурна за 10 минути, филтрират се през мембранен филтър с размер на порите 0,45 µm и филтратът се събира за тестване.
3. Оптимизиране на хроматографските условия
Мобилната фаза е система от 0,01 mol/L калиев дихидрогенфосфатен буфер (pH 2,5) - ацетонитрил (95:5), със скорост на потока 0,8 mL/min и температура на колоната 35°C. Регулирането на пропорцията на ацетонитрила показва, че когато органичната фаза надвиши 10%, времето на задържане на оксаловата киселина се скъсява до по-малко от 3 минути, но се наблюдава „опашка“ на пика. При крайните оптимизирани условия времето на задържане на оксаловата киселина е 4,2 минути, постигайки пълно отделяне от съседните лимонена и ябълчена киселина (разделителна способност > 1,5).
4. Валидиране на метода
Проверката на линейния диапазон показва добра линейна зависимост между площта на пика и концентрацията в диапазона от 10–1000 µg/mL (R² = 0,9993). Границата на откриване (LOD), определена чрез метода на съотношението сигнал/шум, е 0,5 µg/mL. При тестовете за повторяемост, RSD за шест повторни определяния на една и съща проба спанак е 1,8%. Експериментите с възстановяване на шипа на три нива (80%, 100% и 120%) дават средно възстановяване съответно от 98,2%, 102,4% и 97,8%, което отговаря на изискванията за количествен анализ.
5. Анализ на реални проби
Бяха тествани шест търговски достъпни плода и зеленчука: спанак (356 ± 12 mg/100 g), целина (215 ± 9 mg/100 g), домат (18 ± 2 mg/100 g), ябълка (6 ± 1 mg/100 g), банан (не е открит) и броколи (89 ± 5 mg/100 g). Сравнението с националния стандартен метод (GB 5009.277-2016) показва, че относителното отклонение между двата метода е по-малко от 5%, което потвърждава надеждността на този метод. По-специално, методът HPLC показва по-висока чувствителност от традиционните методи за титруване при анализ на проби с ниско съдържание.
6. Ключови бележки
Стриктно контролирайте стойността на pH по време на предварителната обработка на пробата. Ако pH на екстракта надвиши 3, утаяването на калциев оксалат ще доведе до ниски резултати от теста. Мобилната фаза трябва да се приготвя прясна ежедневно, за да се избегне утаяване на соли и запушване на колоната. След всеки 20 инжекции, промивайте колоната с ацетонитрил-вода (30:70) в продължение на 30 минути, за да предотвратите влошаване на ефективността на колоната. За проби, съдържащи пигменти (напр. лилаво зеле), се препоръчва да се добави стъпка на пречистване чрез твърдофазна екстракция преди инжектиране.
7. Указания за приложение и разширяване
Този метод може да бъде разширен до откриване на оксалова киселина в биологични проби като урина и кръв. Чрез регулиране на състава на мобилната фаза (напр. добавяне на тетрабутиламониев хидроксид), оксаловата киселина и нейните метаболити могат да се определят едновременно. В комбинация с масспектрометричен детектор може да се установи по-прецизен метод за откриване на следи. В хранително-вкусовата промишленост този метод може да осигури важна информационна подкрепа за избора на сортове с ниско съдържание на оксалова киселина и оптимизирането на процесите на готвене.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – Оксалова киселина
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. е надежден доставчик и износител на висококачествена оксалова киселина (индустриален клас, мин. 99,6%) от Шандонг, Китай. Нашата оксалова киселина е бяло кристално твърдо вещество, известно още като етандиова киселина, с молекулна формула C₂H₂O₄. Тя се отличава с висока чистота, ниско съдържание на примеси и стабилно качество във всички партиди, отговаряйки на изискванията на текстилната, кожарската, металургичната, преработвателната промишленост на редкоземни елементи, химическото почистване и строителната промишленост.
Доставяме както безводна, така и дихидратна оксалова киселина, налична в торби от 25 кг, 50 кг и 1000 кг насипни торби. Със строги процедури за контрол на качеството, пълни протоколи от тестове и гъвкави планове за доставки, ние гарантираме стабилни доставки и постоянна производителност за купувачите по целия свят. Нашите продукти са широко изнасяни в Югоизточна Азия, Европа, Африка и Северна и Южна Америка, печелейки признание за надеждно качество и конкурентни цени.
Изберете Zibo Anhao Chemical за надеждна доставка на оксалова киселина и професионално химическо обслужване на едно гише.
Изберете Zibo Anhao Chemical за високочиста оксалова киселина, която осигурява стабилна производителност и стойност за вашия бизнес. Свържете се с нас за поръчки на едро или технически спецификации: info@anhaochemical.com
